期刊文章详细信息
文献类型:期刊文章
机构地区:[1]潍坊医学院免疫学教研室,山东省高校免疫学重点实验室,山东潍坊261053
基 金:潍坊医学院研究生创新基金(YC2008014)
年 份:2010
卷 号:32
期 号:5
起止页码:324-327
语 种:中文
收录情况:普通刊
摘 要:目的克隆小鼠mlL-35两亚基mEBI3,mlL-12p35cDNA,并构建mlL-35基因的原核表达载体并进行诱导表达。方法RT—PCR方法从RAW246.7细胞中扩增mEBI3基因及脂多糖体外刺激BALB/c小鼠的脾细胞中扩增mlL-12p35基因,通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker-mlL-12p35基因,并构建原核表达载体pET-30a.mlL-35,转化感受态E.coliBL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测目的蛋白的表达。结果成功克隆了mEBI3、mlL-12p35cDNA,通过重叠PCR方法扩增出mEBI3-Linker—mlL-12p35片段,并构建出原核表达载体pET-30a-mlL-35;在IPTG诱导下在E.coliBL21(DE3)中高效表达相对分子质量(Mr)为50000的重组mlL-35蛋白,目的蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中。结论利用构建的原核表达载体pET-30a-mlL-35成功表达出mlL-35蛋白,为进一步探讨mlL-35的生物学功能奠定了基础:
关 键 词:mIL-35 载体构建 原核表达
分 类 号:R392.11]
参考文献:
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引证文献:
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同被引文献:
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