文献类型：期刊文章

作　　者：成大荣[1] 徐建生[1] 董国雄[1] 李俊宝[1]

机构地区：[1]扬州大学畜牧兽医学院兽医微生物与免疫学教研室,扬州225009

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：江苏省自然科学基金

年　　份：1999

卷　　号：21

期　　号：5

起止页码：349-353

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、普通刊

摘　　要：将由 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增并克隆在ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中的ｓｌｔⅡｅ Ｂ基因切出，并按预定的阅读框架插入表达性质粒载体 ｐ Ｇ Ｅ Ｘ６ｐ１ 中的谷胱苷肽转移酶（ Ｇ Ｓ Ｔ）基因的下游。重组质粒 ｐｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ在大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１ 中以融合蛋白的形式表达 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（命名为 Ｇ Ｓ Ｔ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ），即 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（７５６８ｋ Ｄ）与谷胱苷肽转移酶（２７３３５ｋ Ｄ）相连组成分子量为 ３４８８５ｋ Ｄ 的融合蛋白。通过对重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ的菌体裂解物的 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳分析，以及根据抗原抗体结合反应的免疫学特性，通过 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 鉴定，重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ（含有重组质粒 ｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ的大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１）可以大量表达融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ。根据 Ｇ Ｓ Ｔ 可与其底物谷胱苷肽结合的特性，用谷胱苷肽结合的 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ制备的亲和凝胶纯化表达产物，纯化的表达产物经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ，可以鉴定到分子量约为 ３５ｋ Ｄ 的蛋白条带，这与融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ分子量（３４８８５ｋ Ｄ）相当。

关 键 词：猪  水肿病 SIL-ⅡeB  融合蛋白 基因表达  

分 类 号：S858.285.1] Q78[动物医学类]