文献类型：期刊文章

作　　者：翁仕强[1] 卢瑛[1] 孙晓红[1] 潘迎捷[1]

机构地区：[1]上海海洋大学食品学院食品生物技术实验室,上海201306

出　　处：《免疫学杂志》

基　　金：上海市教育委员会科研创新项目(09YZ274);上海市教育委员会重点学科建设项目(J50704);上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2009)第6-1号);上海海洋大学博士启动基金(B-8203-08-0220)

年　　份：2010

卷　　号：26

期　　号：12

起止页码：1081-1085

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建副溶血性弧菌三种主要溶血毒素(TDH、TRH和TLH)的重组融合表达体系,给后续这三种溶血毒素的大量获取及其特异性抗体的制备、副溶血性弧菌的致病机理等研究提供基础材料。方法首先将副溶血性弧菌标准菌株tdh、trh与tlh基因分别接入克隆载体pGM-T,并转入E.coliTOP10,进行BamHI、HindIII双酶切鉴定和克隆测序。然后从重组克隆质粒中将tdh、trh与tlh基因目的片段分别双酶切出,将其连接到带His标签的表达载体pET30a(+)中后转入E.coliBL21(DE3)中,先通过BamHI、HindIII双酶切以鉴定所构建表达载体的准确性。接着重组表达菌株经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE电泳和Western-blotting来分析鉴定表达结果。结果表达产物的SDS-PAGE电泳结果显示TDH在29000、TRH在30000、TLH在52000附近处出现明显的表达蛋白条带。利用His标签的特异性抗体进行Western-bloting分析,实验结果显示29000、30000、52000附近处的表达蛋白与His抗体均有特异性反应。结论成功构建了TDH、TRH和TLH溶血毒素的原核表达体系,为进一步免疫原性和特异性抗体制备奠定基础。

关 键 词：副溶血性弧菌 溶血毒素 克隆 表达  

分 类 号：R392.1]