文献类型：期刊文章

作　　者：李小波[1,2] 王婷婷[1] 马艳[1] 朱家勇[1] 刘漫宇[1] 金小宝[1]

机构地区：[1]南方医科大学公共卫生与热带医学学院,广州510515 [2]广东药学院基础学院广东省生物活性药物研究重点实验室,广州510006

出　　处：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》

基　　金：2007年度广东省科技计划项目(No2007B020708015)~~

年　　份：2010

卷　　号：28

期　　号：5

起止页码：332-336

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的构建家蝇抗菌肽(攻击素,attacin)成熟肽的重组表达质粒并转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,诱导attacin表达。方法 PCR扩增家蝇抗菌肽attacin基因成熟肽编码区,克隆至酵母表达载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-attacin用SacⅠ酶切线性化后,采用电转化法将其转入毕赤酵母GS115中,通过抗性、表型和PCR筛选多拷贝整合株。甲醇诱导毕赤酵母GS115/pPIC9K-attacin的表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定表达产物,采用琼脂糖孔穴扩散法检测其对大肠埃希菌K12D31的抑制作用。结果重组表达质粒pPIC9K-attacin构建成功,电转化获得多拷贝整合转化子毕赤酵母GS115/pPIC9 K-attacin,表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,在约Mr22000处有蛋白条带,表达产物可抑制E.coli K12D31的生长。结论家蝇抗菌肽attacin在巴斯德毕赤酵母中成功进行了表达。

关 键 词：家蝇 抗菌肽 攻击素  巴斯德毕赤酵母 异源表达

分 类 号：R384.21]