文献类型：期刊文章

作　　者：刘燕[1] 彭聿平[2] 黄彦[2] 黄慧伟[2] 邱一华[2]

机构地区：[1]南通大学医学院诊断学教研室,江苏226001 [2]南通大学医学院生理学教研室,江苏226001

出　　处：《交通医学》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30870929);南通市应用研究计划(K2008006;K2008019)

年　　份：2010

卷　　号：24

期　　号：5

起止页码：463-465

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的:用T-A克隆法构建含酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组质粒,并用实时定量PCR(RQPCR)方法制备标准品。方法:提取小鼠肾上腺髓质组织总RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR,回收纯化电泳胶,T-A克隆与pGEM-T载体连接,转化Top-10感受态细菌,蓝白斑筛选出阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQPCR反应,最后制得含TH的重组质粒标准品。结果:肾上腺髓质TH的表达,PCR扩增,菌液PCR,测序鉴定均证实TH重组到pGEM-T载体上,经RQPCR定量后得到TH重组质粒标准品的标准曲线。结论:该方法能大量制备TH质粒标准品,并且可推广应用。

关 键 词：酪氨酸羟化酶 pGEM-T载体  T-A克隆法  实时定量聚合酶链反应

分 类 号：Q55]