文献类型：期刊文章

作　　者：苏世振[1] 隋文君[1] 李红智[1] 布立敬[1] 胡望雄[1]

机构地区：[1]温州医学院生命科学学院,浙江省医学遗传学重点实验室,浙江温州325035

出　　处：《温州医学院学报》

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目(Y205171);温州市科技局对外合作项目(H20080059)

年　　份：2010

卷　　号：40

期　　号：5

起止页码：431-435

语　　种：中文

收录情况：CAS、IC、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:构建含融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)的T细胞株,为erbB2过度表达肿瘤的靶向基因治疗奠定实验基础。方法:利用SWISS MODEL和PHYRE预测该融合蛋白的三级结构。利用PCR分别从重组质粒pPIC9k、pBullet和pLNCX上扩增出3段基因片段,即片段anti-erbB2 scFv、片段Fc-CD28-CD3(ζ)和信号肽序列signal。利用SOE-PCR将3段序列连接形成融合基因片段signal-anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)。经TA克隆扩增及鉴定后,将融合基因片段与逆转录病毒表达载体pLNCX相连构建重组真核表达载体,脂质体方法转染人T淋巴细胞株Jurkat,G418筛选后用流式细胞术检测融合蛋白稳定表达情况。结果:经预测该融合蛋白在三级结构上可形成功能构象。经PCR、酶切及测序鉴定均证实成功构建重组真核表达载体pLNCX/signal-anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)。经流式细胞术检测,在Jurkat细胞中表达量达23.68%。结论:应用分子克隆的方法成功地构建了重组真核表达载体pLNCX/anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ),融合基因能够在T淋巴细胞株中表达,为制备含该融合基因的原代T淋巴细胞,进行erbB2过度表达肿瘤的靶向基因治疗研究奠定了基础。

关 键 词：ERBB2 基因融合 表达载体  T淋巴细胞 克隆,分子  

分 类 号：R363]