文献类型：期刊文章

作　　者：徐珍[1] 张玉芹[1] 聂永莉[1,2]

机构地区：[1]武汉科技大学医学院细胞与分子生物学研究所,430065 [2]湖北省丹江口汉江集团汉江医院心内科,442700

出　　处：《医学研究杂志》

基　　金：湖北省自然科学基金(2004ABA152);湖北省教育厅重点项目(D20081108)

年　　份：2010

卷　　号：39

期　　号：9

起止页码：54-57

语　　种：中文

收录情况：CSA-PROQEUST、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的通过建立不同的酶切体系,找寻酶切效果好、胶回收试剂盒纯化DNA得率高的实验设计。方法使用XhoⅠ单酶切重组质粒pcDNA3-P2X4,酶切体系的体积分别为:150μl、160μl、170μl、180μl;酶切体系组成为:dddH2O(补足体积)、BufferR(应用浓度是酶切体积的10%)、质粒DNA(无论所得质粒浓度如何,琼脂糖凝胶电泳胶回收的DNA上样量统一为23μg),XhoⅠ10μl(6μl、4μl两次加入);反应温度为:37℃;酶切的时间为2～3h。结果酶切体系越大,所需要的酶切时间越短、酶切效果越好、酶切条带越接近Marker标准条带(通过电泳拍照观察所得),但是胶回收纯化后DNA的浓度却越低:150μl体系DNA的浓度=308.96±8.71μg/ml,160μl体系DNA的浓度=286.62±8.37μg/ml,170μl体系DNA的浓度=245.80±15.64μg/ml,180μl体系DNA的浓度=198.00±16.54μg/ml(方差分析,P<0.05,n=5)。结论将酶切的体系放大,杂质将相对稀释,不需增加酶的用量就能取得较好的酶切效果;提取质粒的浓度和纯度也决定着酶切效果。

关 键 词：琼脂糖凝胶电泳 胶回收  单酶切  DNA纯化

分 类 号：R714.244]