文献类型：期刊文章

作　　者：卢秀萍[1] 陈学军[1] 刘勇[1] 唐启慧[2] 陈禹保[3] 李文正[1]

机构地区：[1]云南省烟草科学研究所,玉溪653100 [2]北京标凯科技有限公司,北京100094 [3]北京中亚国瑞生物经济研究所,北京102206

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家自然科学基金(30560062);云南省烟草专卖局科技开发计划(06A02)资助项目

年　　份：2010

卷　　号：30

期　　号：8

起止页码：27-30

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:克隆烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白基因(glycine-rich RNA-binding protein,GRRBPs)并进行原核表达,为制备抗体和研究烟草抗逆性分子机理打下基础。方法:从总RNA中反转录扩增并克隆烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白NtRGP-1a和NtRGP-3全长cDNA,将cDNA序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pGEX4T-1/NtRGP-1a、pGEX4T-1/NtRGP-3,转化大肠杆菌rosetta,IPTG诱导表达,GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果:重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,蛋白纯度占总蛋白的95%以上。结论:成功克隆和表达了烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白NtRGP-1a和NtRGP-3基因序列,为制备抗体和烟草抗逆性分子机理等进一步的研究奠定了基础。

关 键 词：烟草 富含甘氨酸RNA结合蛋白  克隆表达

分 类 号：Q786]