文献类型：期刊文章

作　　者：吕凤霞[1] 陆兆新[1] 别小妹[1] 林谦[1] 张充[1] 曹林[1] 郭瑶[1] 汤彦翀[1]

机构地区：[1]南京农业大学食品科技学院酶工程研究室,南京210095

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2008AA10Z309);江苏省高新技术计划(No.BG2007335);江苏省科技支撑计划(No.BE2008308)资助~~

年　　份：2010

卷　　号：26

期　　号：8

起止页码：1128-1134

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：以内生多粘类芽胞杆菌EJS-3基因组DNA为模板,PCR扩增PPFE-I基因,并克隆到pMD19-T载体上,构建克隆载体pMD-PPFE-I,经测序正确后,将PPFE-I基因克隆至表达载体pET-DsbA上构建重组表达质粒pET-DsbA/PPFE-I,将其转化至E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下实现了融合蛋白DsbA-PPFE-I的表达,表达产物酶活性达228IU/mL。表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。SDS-PAGE电泳检测表明融合蛋白主要以可溶形式表达,占菌体总蛋白的18.4%。Western blotting结果表明在相应分子量处有一条特异性条带,证实该蛋白为DsbA-PPFE-I融合蛋白。表达产物通过Ni亲和柱、凝血酶酶切及Sephadex G-100等步骤进行分离纯化,并用MALDI-TOF质谱对重组酶进行了鉴定。纯化后的表达产物在纤维蛋白平板上表现出明显的纤溶活性。

关 键 词：内生菌 多粘类芽胞杆菌  纤溶酶 基因克隆  融合表达  

分 类 号：Q78]