文献类型：期刊文章

作　　者：陆丽君[1] 李玲玲[2] 刘建晓[2] 王佳[2] 朱珊丽[2] 陈筱菲[1] 张丽芳[1]

机构地区：[1]温州医学院附属第一医院,325000 [2]温州医学院微生物学与免疫学教研室/分子病毒与免疫学研究所,325035

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

基　　金：基金项目：国家自然科学基金资助项目（30671882）;温州市科技局科研基金资助项目（Y20090248）

年　　份：2010

卷　　号：30

期　　号：7

起止页码：615-620

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 对EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白2（LMP2）中富含T、B细胞多表位肽段基因进行原核表达,并分析该多表位蛋白的抗原特性.方法 利用计算机在线软件预测EBV LMP2蛋白的CTL表位、Th表位.选取富含CTL表位和Th表位的肽段,兼顾其上下游已预测的B细胞表位,组成含多个T、B细胞表位的EBV LMP2多表位,该多表位基因序列经原核密码子优化后全序列合成,并克隆入原核表达载体pET32a（＋）得到pET32a（＋）/EBV-LMP2多表位重组质粒,经IPTG诱导在E.coli BL21（DE3）表达并纯化,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定;采用EBV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清进行Western blot分析其抗原特性;并利用EBV-LMP2多表位蛋白免疫BALB/c小鼠,分别采用LDH和ELISA方法检测小鼠脾细胞特异性CTL杀伤效应及血清特异性抗体IgG水平,以分析该表位蛋白的免疫原性.结果 LMP2（aa195-232）和LMP2（aa419-436）肽段富含CTL、Th和B细胞表位,将其串联后作为EBV LMP2多表位,该多表位基因在大肠杆菌中获得了表达.表达产物的相对分子质量（Mr）约27×103,与预期Mr相符;经Western blot证实EBV-LMP2多表位具有抗原特异性,可被EBV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清特异性抗体识别;小鼠免疫结果显示EBVLMP2多表位可诱导机体产生特异性的CTL杀伤效应,随着效靶比（1：5,1：10,1：25）增加,CTL杀伤活性逐渐增强（12.52%±2.59%,21.80%±1.08%,23.68%±3.74%）,同时产生了特异性血清IgG抗体反应（A490=0.258±0.040）,与对照组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 本研究设计的EBV-LMP2多表位具有良好的抗原性和一定的免疫原性.

关 键 词：EB病毒 潜伏膜蛋白 表位 表达  

分 类 号：R3[基础医学类]