文献类型：期刊文章

作　　者：张烨[1] 于在江[1] 唐启慧[2] 陈禹保[3] 辛丽[1] 陈永坤[1] 陈清轩[2] 舒跃龙[1]

机构地区：[1]中国疾病预防控制中心病毒病所国家流感中心,北京100052 [2]北京标凯科技有限公司,北京100094 [3]北京中亚国瑞生物经济研究所,北京102206

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家科技支撑计划(2006BAD06A15)资助项目

年　　份：2010

卷　　号：30

期　　号：7

起止页码：33-38

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法:在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMETA上,构建了重组表达质粒pMETA/HA(52～1545bp),pMETA/NA(121～1254bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果:重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2HA、NA基因序列,为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。

关 键 词：禽流感病毒H9N2  血凝素 神经氨酸酶 真核酵母表达  

分 类 号：Q786]