文献类型：期刊文章

作　　者：王金良[1] 陈宏文[1]

机构地区：[1]华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室,福建泉州362021

出　　处：《食品科学》

基　　金：福建省自然科学基金项目(D0810015);福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划项目(07FJRC03)

年　　份：2010

卷　　号：31

期　　号：11

起止页码：202-205

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EI、FSTA、IC、JST、RCCSE、RSC、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：建立以乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶基因(pyrG)为选择标志,以米曲霉为宿主菌的同源转化系统。以米曲霉基因组为模板,通过PCR扩增获得pyrG基因,将该片段与表达载体pMD18-T相连,转化大肠杆菌DH5α,经蓝白斑筛选、PCR快速筛选、酶切和测序验证,获得重组质粒pMD-pyrG,完成pyrG基因的克隆。序列分析表明该基因与米曲霉KBN616的pyrG基因编码序列的同源性为99.9%,两者经推导的氨基酸的同源性为99.6%。以米曲霉pyrG营养缺陷株为受体菌,通过PEG/CaCl2诱导的原生质体转化方法,将重组质粒导入该受体菌,使米曲霉pyrG缺陷株发生基因转化,成为pyrG+,由此成功建立了以pyrG为筛选标记基因、同型米曲霉pyrG基因缺陷株为受体菌的基因转化系统。

关 键 词：重组质粒 克隆 同源转化系统  

分 类 号：Q785]