文献类型：期刊文章

作　　者：宋银宏[1] 刘燕[1,2] 牛力[3] 翁秀芳[1] 孙伟[1] 于倩[1] 吴雄文[1]

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系,武汉430030 [2]九江学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室,九江332000 [3]九江学院基础医学院生理学与病理生理学教研室,九江332000

出　　处：《华中科技大学学报（医学版）》

基　　金：国家高技术研究发展计划("863"计划)资助项目(No.2008AA02Z113)

年　　份：2010

卷　　号：39

期　　号：3

起止页码：305-310

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建HLA-DR1(由DRA和DRB1*01基因编码)杆状病毒表达载体,并使其在昆虫细胞内得到表达。方法采用RT-PCR方法从721.221细胞中扩增DRα和DRβ的信号肽及胞外序列,运用重叠PCR将DRα和DRβ片段分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,成为DRα-Fos和DRβ-Jun,DRα和DRβ可凭借Fos和Jun的亮氨酸拉链结合形成DR1分子,再通过EcoRⅠ酶切位点将DRα-Fos和人IgG1的Fc段相连,形成DRα-Fos-Fc重组序列,2个同源的DR1分子可通过IgG1的Fc段的二硫键结合形成二聚体。分别将DRα-Fos-Fc及DRβ-Jun插入杆状病毒表达载体pFastBacTMDual的2个多克隆位点处,构建出重组载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc]。对构建的载体进行PCR及限制性内切酶酶切鉴定和测序。采用脂质体转染方法将表达载体转入昆虫细胞系Sf9中,通过双抗夹心ELISA及Westernblot检测HLA-DR1的表达。结果 PCR及酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且序列与GenBank一致。ELISA和Westernblot检测表明DR1杆状病毒感染的Sf9细胞培养上清HLA-DR1表达呈阳性,且表达的HLA-DR1分子具有正确的构象。结论成功构建出杆状病毒表达载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc],并在Sf9细胞中得到表达,为研究HLA-DR1限制性的T细胞应答奠定了基础。

关 键 词：HLA-DR1  二聚体 杆状病毒载体 昆虫细胞 基因表达

分 类 号：R34-33[基础医学类]