文献类型：期刊文章

作　　者：林健聪[1] 张敏静[1,2] 苏志坚[1,3] 陈红霞[1] 邱壮伟[1] 娄国锋[1] 项琪[1,3,2] 黄亚东[1,3,2]

机构地区：[1]暨南大学生命科学技术学院医药生物技术研究开发中心,广州510632 [2]基因工程药物国家工程研究中心,广州510632 [3]广东省生物工程药物重点实验室,广州510632

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金："重大新药创制"国家科技重大专项(2009ZX09103-749);科技部中小型创新基金(2008A10905004);国家自然科学基金(30670541);广东省教育部产学研结合项目(2009B090300285);广东省博士启动项目(9451093201003248)资助项目

年　　份：2010

卷　　号：30

期　　号：5

起止页码：11-17

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：构建表达Tat与人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)融合蛋白的重组质粒pET3c Tat-aFGF14-154和pET3c-Tat-aFGF27-154,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中。37℃,1mmol/L的IPTG诱导4h后,获得分子量约为18kDa的融合蛋白,表达量分别占菌体总蛋白的42%和24%。利用阳离子交换(CM-Sepharose FF)、肝素亲和层析(Heparin-Sepharose CL-6B)以及分子筛(Sephadex G-25)联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白,得率分别为93ml/L和78mg/L。Tat-aFGF14-154及其对照蛋白aFGF14-154对Balb/c3T3细胞有明显促细胞增殖的作用,最佳作用浓度分别为1280ng/ml和160ng/ml。而Tat-aFGF27-154及其对照蛋白aFGF27-154则几乎没有促细胞增殖活性。免疫荧光分析结果表明,Tat-aFGF14-154及Tat-aFGF27-154均能穿过PC12、Balbc/3T3、HaCaT和海马神经元细胞的细胞膜,并主要定位于细胞浆中。此外,四种重组蛋白均能降低Aβ25-35对大鼠海马神经元细胞的毒性,在剂量为1000ng/ml时,Tat-aFGF14-154、Tat-aFGF27-154、aFGF14-154及aFGF27-154细胞存活率分别为90.66%、81.87%、85.71%和78.02%,而Aβ25-35模型组的存活率仅为56.87%。

关 键 词：穿膜肽 人酸性成纤维细胞生长因子 融合蛋白 神经元  

分 类 号：Q786]