文献类型：期刊文章

作　　者：张烨[1] 于在江[1] 辛丽[1] 陈永坤[1] 唐启慧[2] 陈禹保[3] 陈清轩[2] 舒跃龙[1]

机构地区：[1]中国疾病预防控制中心病毒病所国家流感中心,北京100052 [2]北京标凯科技有限公司,北京100094 [3]北京中亚国瑞生物经济研究所,北京102206

出　　处：《微生物学通报》

基　　金：国家科技支撑计划资助项目(No2006BAD06A15)

年　　份：2010

卷　　号：37

期　　号：6

起止页码：881-887

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短)、pET32a(+)/NA(截短)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2 HA、NA基因序列。为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。

关 键 词：禽流感病毒H9N2  血凝素 神经氨酸酶 克隆表达

分 类 号：S852.65]