文献类型：期刊文章

作　　者：孙杰[1] 刘玉华[2] 陈永井[1] 郭静雅[1] 陈昌友[1] 胡玲玲[3] 陈明心[1] 杜阳阳[1] 徐耀瑜[1] 邱玉华[1]

机构地区：[1]苏州大学医学部免疫学系,苏州215123 [2]杭州师范大学附属医院检验科,杭州310015 [3]南京医科大学附属第二医院检验科,南京210011

出　　处：《中国免疫学杂志》

基　　金：科技部科技重大专项资助(No.2009ZX09103-705)

年　　份：2010

卷　　号：26

期　　号：5

起止页码：387-391

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应。方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RNA,RT-PCR扩增人CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集培养上清感染L929细胞,500μg/mlzeocin加压筛选获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3。采用流式细胞术和RT-PCR分别从蛋白及基因水平对CXCR3的表达进行鉴定。Transwell分析L929-CXCR3细胞在Mig、IP-10及I-TAC作用下的迁移率。结果:构建了含人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了人CXCR3基因转染细胞株L929-CXCR3,其膜表面CXCR3分子的阳性表达率为98.4%;趋化L929-CXCR3发生迁移的最小配体浓度分别为Mig10ng/ml、IP-105ng/ml及I-TAC1ng/ml,相应迁移率分别为2.46%、2.34%及2.24%。结论:L929-CXCR3细胞株的建立为研究CXCR3信号转导与生物学功能及制备相应的单克隆抗体奠定了基础。

关 键 词：CXCR3 趋化因子 基因转染 逆转录病毒 稳定表达  

分 类 号：R392.11]