文献类型：期刊文章

作　　者：陈伟[1] 韩波[1] 钱垂文[1] 刘秋英[1] 熊盛[1]

机构地区：[1]暨南大学生物医药研究开发基地广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心,广州510630

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家科技支撑计划(No.2008BA163B05);教育部新世纪优秀人才计划(No.NCET-07-0376);暨南大学211经费资助~~

年　　份：2010

卷　　号：26

期　　号：4

起止页码：538-544

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)具有强效抗HIV及其他包膜病毒活性,该蛋白序列特殊,难以重组制备,在大肠杆菌细胞质中形成包涵体。本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对CVN原始核苷酸序列进行优化,通过多次PCR合成SUMO-CVN的全长DNA序列,构建pET3c-SUMO-CVN重组表达质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株。通过对诱导剂浓度和诱导时间的优化,发现以0.5mmol/LIPTG在20℃诱导24h可获得最高表达,SDS-PAGE结果显示,SUMO-CVN为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的28%;经特异性的SUMO蛋白酶对融合蛋白进行酶切及两步Ni-NTA凝胶亲和层析可以得到纯度较高的重组CVN蛋白。ELISA结果表明,重组蛋白CVN与gp120蛋白有较高的亲和力。体外抗病毒活性实验表明,重组蛋白CVN在纳摩尔浓度具有很好的抗HSV-1和HIV-1/ⅢB活性;这为开发基于CVN的新型、高效抗病毒药物打下了基础。

关 键 词：蓝藻抗病毒蛋白-N  表达  纯化 HSV-1 HIV-1  

分 类 号：Q78]