文献类型：期刊文章

作　　者：杨永胜[1] 陈春花[2] 宋勤叶[1] 左玉柱[1]

机构地区：[1]河北农业大学动物科技学院,河北保定071001 [2]河北省邯郸市动物疫病预防控制中心,河北邯郸056005

出　　处：《中国农学通报》

基　　金：国家自然基金项目"猪圆环病毒2型与猪细小病毒协同感染对猪免疫功能影响的细胞与分子机制"(30771600)

年　　份：2010

卷　　号：26

期　　号：11

起止页码：1-6

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CSCD、CSCD_E2011_2012、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：根据猪α1干扰素(pocine interferon-alpha1,poIFN-α1)的全基因序列(EU364896)设计合成1对特异引物,通过RT-PCR从三元杂交仔猪外周血淋巴细胞扩增出poIFN-α1全基因,将该基因克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-T-poIFN-α1,进行测序。以pGEM-T-poIFN-α1为模板,经PCR扩增带有酶切位点的poIFN-α1基因,将其定向克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-6P-poIFNα1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白诱导表达和鉴定,并确定蛋白最佳表达条件。序列分析表明,克隆的poIFN-α1基因全长546bp,编码181个氨基酸,前23个氨基酸组成信号肽,无糖基化位点。SDS-PAGE和Western blotting证实重组表达菌经IPTG诱导后,可表达相对分子质量约46ku的融合蛋白(GST-poIFN-α1)。当以1.0mmol/L的IPTG于37℃下诱导表达9h时,蛋白表达量最高。poIFN-α1基因的克隆与表达为进一步研究其抗病毒活性,开发病毒治疗和疫苗免疫增强用生物制剂奠定了基础。

关 键 词：猪α1  干扰素 克隆 原核表达 鉴定  

分 类 号：S852.4]