文献类型：期刊文章

作　　者：侯宇[1] 赵利淦[1] 张美英[1] 何丽容[1] 边六交[1] 张玲[1] 杨瑞仪[1] 林剑[1]

机构地区：[1]暨南大学生物工程研究所

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：国务院侨办重点学科科研基金

年　　份：1998

卷　　号：14

期　　号：6

起止页码：655-660

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、WOS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰＫ－Ａ．表达产物为可溶性的非融合蛋白，占菌体总蛋白４２％．斑点ＥＬＩＳＡ法鉴定表明表达产物与ＮＤＰＫ－Ａ标准抗血清呈阳性反应．以ＤＥＡＥ纤维素弱阴离子交换层析、ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化ｒＮＤＰＫ－Ａ，得纯度为９６．７％的目标蛋白．以反相高效液相色谱法进行酶活性分析，表明纯化的ｒＮＤＰＫ－Ａ能催化ＡＴＰ＋ＵＤＰ＝ＡＤＰ＋ＵＴＰ的反应，比活性为８００Ｕ／ｍｇ蛋白．

关 键 词：Nm23-H1/NDPK-A  基因表达 分离纯化

分 类 号：R730.2] Q78[临床医学类]