文献类型：期刊文章

作　　者：余建法[1] 周晴[2] 马志章[2] 丁鸣[3] 徐建芬[2] 丁仁瑞[2]

机构地区：[1]浙江中医学院,杭州310012 [2]杭州大学生命科学学院免疫工程实验室 [3]浙江大学生物科学与技术系

出　　处：《中国肿瘤生物治疗杂志》

基　　金：国家自然科学基金(39670815)资助项目。

年　　份：1998

卷　　号：5

期　　号：4

起止页码：256-260

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2011_2012、DOAJ、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、UPD、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni^(2+)-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2～2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0～6.6)×10~6U/map.

关 键 词：人IFNγ/TNFβ  融合蛋白 分离纯化

分 类 号：Q511]