文献类型：期刊文章

作　　者：何晓华[1] 余水静[1] 陈万义[1] 施春雷[1] 孟江洪[2] 史贤明[1]

机构地区：[1]上海交通大学农业与生物学院,陆伯勋食品安全研究中心,中美食品安全联合研究中心,上海200240 [2]马里兰大学食品安全与应用营养学联合研究院(JIFSAN)和营养与食品科学系

出　　处：《微生物学报》

基　　金：上海市科委项目(09DZ0503300;091422021200;08DZ0504200);国家科技支撑计划世博科技专项(2009BAK43B31)~~

年　　份：2010

卷　　号：50

期　　号：3

起止页码：387-394

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PROQUEST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】发掘副溶血弧菌特异性更强的检测靶点,并人工构建扩增内标,建立可以有效避免假阴性的新PCR检测体系。【方法】利用生物信息学方法,从副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)基因组DNA中发掘特异性很高的序列,并设计相应的特异性引物,人工构建扩增内标,建立PCR检测体系。【结果】本研究发掘得到的序列vp1332特异性很强,经检索,该序列是编码ABC转运子接合蛋白组分的基因片段,根据此序列设计一对特异检测引物(vp1332L/vp1332R),同时,构建了扩增内标,并建立了PCR检测体系。利用该体系对296株副溶血弧菌和33株非副溶血弧菌进行检测,结果显示,所有以副溶血弧菌为模板的PCR反应均可扩增到一条343bp的特异片段,而模板来源于非副溶血弧菌的则只能扩增到一条499bp的扩增内标片段。灵敏度实验表明,该PCR反应体系的检测灵敏度为1.6×102cfu/mL。人工污染实验表明,起始染菌量为1.24cfu/25g样品时经8h增菌,即可检测到副溶血弧菌。实际样品检测结果也证实该方法的有效性。【结论】本研究建立的PCR反应体系能特异地检测副溶血弧菌,并可有效地排除假阴性,提高检测准确率。

关 键 词：副溶血弧菌 PCR检测 扩增内标 假阴性

分 类 号：TE254.7]