文献类型：期刊文章

作　　者：彭江龙[1] 崔玉宝[2] 王华民[1] 周鹰[2] 牛莉娜[1] 吴洁[1]

机构地区：[1]海南医学院微生物学与免疫学教研室,海口571101 [2]盐城卫生职业技术学院卫生技术研究所,盐城224006

出　　处：《中国免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(30860261);海南省自然科学基金(807070)

年　　份：2010

卷　　号：26

期　　号：3

起止页码：250-253

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:构建尘螨变应原Der f1植物表达载体并侵染烟草叶片表达。方法:从保存的含pET28a(+)-Der f1的甘油菌株中扩增Der f1基因,并克隆到质粒载体中,提取质粒,进行测序;以ClaⅠ、SalⅠ双酶切,将Der f1基因克隆到马铃薯X病毒(PVX)载体中,构建植物病毒表达载体;将PVX-Der f1转化脓杆菌,挑取Kan、Tet抗性阳性的菌株侵染烟草叶片进行蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定和分析。结果:经SDS-PAGE分析,有4株烟草叶片蛋白提取物在34Mr处有特异性蛋白条带;经Western blot进一步验证其变应原,结果显示,烟草叶片中获得的重组蛋白在34Mr处与阳性血清发生特异性结合,而与阴性血清并不发生结合。结论:成功构建了植物病毒表达载体PVX-Der f1并获得表达,为尘螨变应原Der f1的研究提供新思路。

关 键 词：尘螨 Derf1  马铃薯X病毒(PVX)  植物表达

分 类 号：R384.4]