文献类型：期刊文章

作　　者：夏蒲[1] 徐小燕[2] 贾宝萍[3] 王薇[2] 关一夫[1] 高野康雄[4] 郑华川[1]

机构地区：[1]中国医科大学基础医学院生物化学研究室,沈阳110001 [2]中国医科大学基础医学院病理生理学教研室 [3]中国医科大学档案馆,沈阳110001 [4]日本富山大学医学部病理诊断教室

出　　处：《中国医科大学学报》

基　　金：沈阳人才资源开发基金项目;辽宁省百千万人才工程资助项目;教育部归国人员科研启动基金项目;人事部留学人员科技活动择优资助项目;2009年沈阳市科学技术计划资助项目(1091175-1-00)

年　　份：2010

卷　　号：39

期　　号：1

起止页码：18-21

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的利用鼠胃黏膜上皮细胞中高活性的角蛋白19(K19)启动子构建K19-JCVT抗原表达质粒并进行鉴定。方法利用PCR方法突变JC病毒T抗原中的NdeⅠ位点,并在两端插入BclⅠ位点,通过BamHⅠ位点将DNA片段与K19启动子连接,构建K19-JCVT抗原质粒。利用酶切和DNA测序确认其DNA序列。免疫组化筛选细胞角蛋白19阳性胃癌细胞,对细胞角蛋白19表达阳性的胃癌细胞系AGS进行K19-JCVT抗原质粒转染,用Western blot方法检测JCVT抗原的表达情况。结果K19-JCVT抗原表达质粒成功构建,AGS胃癌细胞系高表达细胞角蛋白19并用于K19-JCVT抗原表达质粒转染,转染K19-T抗原质粒的AGS细胞系有T抗原表达。结论同义突变和相似连接在质粒构建中起到关键作用,酶切位点的甲基化也是值得注意的问题。

关 键 词：JC病毒 T抗原 真核表达 载体构建  

分 类 号：R446.5] R394[临床医学类]