文献类型：期刊文章

作　　者：尹伟[1] 徐洁萍[1] 张金阳[1] 颜焰[1] 周继勇[1]

机构地区：[1]浙江大学农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室,浙江杭州310029

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：国家农业公益性行业科研专项(200803014);浙江省重大科技攻关项目(2006C12021)

年　　份：2010

卷　　号：32

期　　号：2

起止页码：86-89

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重组杆状病毒。SDS-PAGE、western blot和间接免疫荧光对表达的蛋白进行鉴定和反应原性分析。分别以重组杆状病毒表达的核蛋白、原核表达核蛋白为包被抗原进行ELISA检测。结果表明,在昆虫细胞中表达的狂犬病病毒重组核蛋白能与鼠抗RV核蛋白单克隆抗体和RV阳性血清特异性结合,其相对分子量约为50.5ku。以重组杆状病毒表达的核蛋白为抗原建立的rNP-ELISA的敏感性、特异性、符合率分别为86.36%,89.83%,90.00%,优于大肠杆菌表达的RV核蛋白。说明杆状病毒系统表达的核蛋白是建立RV核蛋白ELISA抗体检测方法的理想抗原。

关 键 词：狂犬病病毒  核蛋白基因 Bac—To—Bac/AcMNPV杆状病毒表达系统.  

分 类 号：S852.659]