文献类型：期刊文章

作　　者：屈睿[1] 刘加宝[2] 桑建荣[1] 任峰[1] 赵爽[2] 陈永昌[1]

机构地区：[1]江苏大学基础医学研究所生理学研究室,江苏镇江212013 [2]江苏大学临床医学院,江苏镇江212013

出　　处：《江苏大学学报（医学版）》

基　　金：江苏省自然科学基金资助项目(BK2007091)

年　　份：2010

卷　　号：20

期　　号：1

起止页码：36-39

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、IC、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:构建携带Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(PKGⅡ)基因的重组腺病毒载体,并以此初步研究PKGⅡ对增殖相关的MAPK信号转导的影响。方法:将PKGⅡcDNA片段自载体pRC/CMV-GKⅡ(wt)中切出,克隆至穿梭质粒pENTR 1A,用ClonaseⅡ将pENTR-PKGⅡ中的PKGⅡcDNA片段定向克隆到pAd/CMV/V5-DEST中构建pAd/CMV/V5-DEST-PKGⅡ(Ad-PKGⅡ)。重组质粒Ad-PKGⅡ用PacⅠ酶酶切,使其线性化,再用脂质体转染法转染HEK293A细胞进行包装和扩增,微量全细胞病变法检测病毒滴度,蛋白质印迹法检测重组腺病毒Ad-PKGⅡ感染细胞后PKGⅡ的表达以及MAPK通路关键成分胞外信号调节激酶(ERK)活性的变化。结果:重组腺病毒滴度达5×109pfu/ml,蛋白质印迹法检测显示重组腺病毒感染CS54细胞后使其PKGⅡ表达明显增高;在BGC-823胃癌细胞株,PKGⅡ对EGF导致的ERK的激活有明显抑制作用。结论:成功构建了携带PKGⅡ基因的重组腺病毒,初步证明PKGⅡ对细胞增殖相关信号转导有抑制作用,为进一步研究PKGⅡ与肿瘤细胞发生发展的关系提供了基础。

关 键 词：Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶  腺病毒载体 DNA重组 胞外信号调节激酶

分 类 号：Q257]