文献类型：期刊文章

作　　者：吕晓慧[1] 胡亚冬[1] 胡凤娟[1] 刘大岭[1] 姚冬生[1]

机构地区：[1]暨南大学微生物技术研究所,广州510632

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：广东省科技攻关项目(No.2005B20601004)资助~~

年　　份：2009

卷　　号：25

期　　号：12

起止页码：1900-1906

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：本研究利用易错PCR技术突变假密环菌Armillariella tabescens MAN47 β-甘露聚糖酶野生型基因,PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYCα上连接,在大肠杆菌DH5α中扩增后电转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,构建了库容为104的初级突变体库,筛选得到耐高温最佳突变株M262。DNS法测得80oC处理30min后最大酶活力为25U/mL,较之野生型最适条件酶活力提高了4.3倍。序列分析表明,突变体有3个碱基发生了突变:T343A/C827T/T1139C,相应的氨基酸改变为Ser115Thr/Thr276Met/Val380Ala,利用SWISS-MODEL数据库同源建模显示,这3个突变氨基酸分别位于第4个β折叠的第6个氨基酸、第6个α螺旋的第1个氨基酸、第10个α螺旋和第11个β折叠之间的转角。

关 键 词：定向进化 Β-甘露聚糖酶 易错PCR 热稳定性

分 类 号：Q78]