文献类型：期刊文章

作　　者：谢树章[1,2] 秦平伟[1] 张迷[1] 胡雨晴[1] 李名扬[1] 眭顺照[1]

机构地区：[1]西南大学园艺园林学院重庆市花卉工程技术研究中心,重庆400715 [2]重庆市农业科学院生物技术研究中心,重庆400055

出　　处：《林业科学》

基　　金：重庆市自然科学基金项目;CSTC;(2006BB1336);西南大学基金项目(SWUB2006040)

年　　份：2009

卷　　号：45

期　　号：12

起止页码：36-41

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EI、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：在构建好蜡梅花cDNA文库并进行EST分析基础上,通过随机克隆测序,得到1个蜡梅几丁质酶的cDNA基因,命名为Cpchia(GenBank登录号:FJ749130)。CpchiacDNA全长为1184bp,开放阅读框为954bp,编码317个氨基酸,其结构包括信号肽、几丁质结合域、可变交联区、催化区,无C端延伸区,为ClassⅠb型胞外几丁质酶,属于几丁质酶第19家族。将Cpchia克隆到原核表达载体pET-28a(+),在大肠杆菌BL2l细胞中以包涵体形式表达融合蛋白,利用透析法获得复性蛋白,其几丁质酶活性经DNS法检测达到200U.mL-1。酶活性和稳定性分析表明,试验条件下,pH7.0有利于酶的稳定和活性发挥,40℃活性最高,在0℃低温下也有较高活性。上述结果说明,分离的Cpchia基因编码蛋白具有几丁质酶活性,而且可能与蜡梅花的抗寒性形成有关。

关 键 词：几丁质酶 克隆 原核表达 蜡梅

分 类 号：S718.46[林学类] Q943.2[植物生产类]