文献类型：期刊文章

作　　者：刘治江[1] 贺淹才[1] 李红然[1] 刘嘉[1] 施腾鑫[1]

机构地区：[1]华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室,福建泉州362021

出　　处：《华侨大学学报（自然科学版）》

基　　金：福建省自然科学基金资助项目(C04010011)

年　　份：2010

卷　　号：31

期　　号：1

起止页码：58-64

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAS、IC、MR、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60℃,而出发菌该酶的最适温度为40℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变.

关 键 词：粘质沙雷氏菌 几丁质酶C  分子定向进化 易错聚合酶链反应  包涵体

分 类 号：Q786] Q550.3