文献类型：期刊文章

作　　者：杨博宇[1] 王锋[2] 王玮[3]

机构地区：[1]厦门市第二医院集美骨科,福建省厦门市361021 [2]福建医科大学人体解剖与组织胚胎学系,福建省福州市350001 [3]福建医科大学神经生物学研究中心,福建省福州市350001

出　　处：《中国组织工程研究与临床康复》

年　　份：2009

卷　　号：13

期　　号：49

起止页码：9761-9764

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2011_2012、EMBASE、IC、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：背景:目前国内外对嗅鞘细胞培养条件的报道各不相同,个别方法重复性较差,不利于实际应用。目的:观察差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化法纯化大鼠嗅鞘细胞的效果,并与化学药物法、差速贴壁法培养结果进行比较。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-06/2008-06在福建医科大学人体解剖与组织胚胎学系实验室完成。材料:新生2d的SD大鼠8只,由福建医科大学试验动物中心提供。方法:无菌条件下完整取出大鼠双侧嗅球,剥除嗅球表面的软脑膜及毛细血管网,剪成0.5mm3的小块进行胰蛋白酶消化,过筛后按4.0×108L-1密度种植于包被多聚左旋赖氨酸的培养瓶中进行原代培养。设立4组:①未经纯化的常规对照组。②化学药物组加入5μmol/L阿糖胞苷抑制成纤维细胞分裂。③差速贴壁组采用Nash差速贴壁法纯化嗅鞘细胞。④差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化组首先采用Nash差速贴壁法去除大部分成纤维细胞,而后对于少量残留的成纤维细胞加入阿糖胞苷处理,培养6d贴壁细胞大部分融合后,加入1.25g/L胰蛋白酶消化1min,显微镜下见突起回缩、细胞变圆、少量细胞浮起时终止消化。主要观察指标:嗅鞘细胞的形态,NGFRp75免疫细胞荧光染色结果。结果:体外培养的新生大鼠嗅球嗅鞘细胞主要为双极或三极细胞,其突起细长;未经纯化的常规对照组培养7d时视野内成纤维细胞已达60%以上,至14d成纤维细胞完全长满;经过纯化处理的另外3组始终以嗅鞘细胞居多,嗅鞘细胞的形态与原代基本相同。存活的双极和3极嗅鞘细胞呈NGFRp75阳性反应,但化学药物组、差速贴壁组嗅鞘细胞纯度偏低,仅为75%;差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化组嗅鞘细胞纯化效率明显增高,达85%以上。结论:实验结果证实了差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化法的三合一操作技术,是一种高效率的纯化培养嗅球嗅鞘细

关 键 词：差速贴壁 阿糖胞苷 胰酶限时消化  纯化 嗅球 嗅鞘细胞

分 类 号：R394.2]