文献类型：期刊文章

作　　者：李慧慧[1] 朱玉球[1] 斯金平[1] 高燕会[1]

机构地区：[1]浙江林学院生物技术实验室,浙江临安311300

出　　处：《生物技术》

基　　金：浙江省科技厅项目(2008C32012)资助

年　　份：2009

卷　　号：19

期　　号：6

起止页码：38-41

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、核心刊

摘　　要：目的：建立栝楼最佳ISSR-PCR正交优化体系,为开展栝楼ISSR分子标记奠定技术基础。方法：采用正交试验设计对影响栝楼ISSR-PCR扩增的重要参数（DNA模板、MgCl2、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶）进行优化试验,同时进行不同温度梯度试验和ISSR体系筛选。结果：最佳的栝楼ISSR-PCR的反应体系（20μl）为：30ng模板DNA,2.0mmol/L MgCl2,0.3mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物,0.5U Taq DNA聚合酶;退火温度为52℃-55℃;扩增反应程序为：94℃预变性5min;94℃变性30s,52℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环;72℃延伸7min;4℃保存。结论：建立了栝楼的最佳ISSR反应体系。

关 键 词：栝楼 简单序列重复区间(ISSR)  正交设计 优化体系  

分 类 号：S567.23]