文献类型：期刊文章

作　　者：郑雪莲[1] 辜俊[1] 赵献峰[1] 史洵玮[1] 何海宁[1] 孙红[1] 钟应佳[1]

机构地区：[1]四川大学华西第二医院分子与转化医学实验室,四川成都610041

出　　处：《四川医学》

年　　份：2009

卷　　号：30

期　　号：11

起止页码：1687-1689

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的改进传统常规法在椎间盘组织中总RNA提取,获得高质量的椎间盘组织总RNA。方法健康成年Newsland白兔,完整取出椎间盘组织,随机分RNA传统方法组和酶消化改良组。传统组,按Trizol法提取总RNA;酶消化改良组,加入0.2%Ⅱ型胶原酶,置于细胞培养箱消化数小时,加入含小牛血清的PBS液终止,离心收集细胞。余步骤同传统组。结果传统组,电泳结果未见28S和18S条带,5S条带部分可见;A260/280比值在1.5左右,蛋白多糖污染重。而酶消化组,电泳结果可见清晰的28S、18S和5S条带,且28S条带的亮度约是18S的两倍;A260/280比值在1.8～2.0之间,无蛋白污染,此法提取的RNA,逆转录后可用于扩增β-actin基因。结论酶消化改良法可望成为椎间盘组织总RNA提取的好方法。RNA片断完整,纯度高,无蛋白污染,不影响后续基因表达（RT-PCR）的分析,并且重复性好,可以推广。

关 键 词：椎间盘组织 Ⅱ型胶原酶  RNA提取

分 类 号：R346[基础医学类]