文献类型：期刊文章

作　　者：帖超男[1] 王雅静[2] 谢辉[3] 毕世樑[4] 刘佩娜[2] 廖琳[2]

机构地区：[1]成都中医药大学医学技术学院形态学教研室,四川成都610041 [2]四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室 [3]郑州市第五人民医院检验科 [4]四川大学华西第二医院妇产科

出　　处：《预防医学情报杂志》

基　　金：国家自然科学基金(No.39970667)

年　　份：2009

卷　　号：25

期　　号：11

起止页码：889-891

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶(adenynate kinase,以下简称AK)基因原核表达质粒并予以表达。方法AKDNA的克隆载体PMD-18T-AK经限制性内切酶BamHI和XbaI双酶切,得到含这2个酶切位点之AKDNA片段,T4连接酶连接到含有2个酶切位点的原核表达载体PUC18,构建出重组原核表达质粒PUC18-AK,经PCR、酶切鉴定。重组质粒PUC18-AK经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在大肠埃希菌中进行初步表达。结果AK基因体外扩增产物大小均为690bp,重组原核表达质粒经PCR及酶切鉴定表明获得正确重组子。在大肠埃希菌中表达出AK蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析与理论预测值相符。经蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定具有免疫原性。结论成功地构建了AK基因原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达了AK蛋白。

关 键 词：阴道毛滴虫 氢化酶体  腺苷酸激酶 基因 原核表达质粒

分 类 号：R382.21]