文献类型：期刊文章

作　　者：周晴[1,2,3,4] 马志章[1,2,3,4] 冯根生[1,2,3,4] 陈常庆[1,2,3,4] 张惟杰[1,2,3,4] 丁仁瑞[1,2,3,4]

机构地区：[1]杭州大学生命科学学院免疫工程实验室 [2]美国印第安那大学Walther肿瘤研究中心 [3]中国科学院上海生物工程研究中心 [4]上海交通大学生物系

出　　处：《基础医学与临床》

基　　金：国家自然科学基金;浙江省自然科学基金

年　　份：1998

卷　　号：18

期　　号：6

起止页码：51-56

语　　种：中文

收录情况：CSCD、CSCD2011_2012、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：利用ＤＮＡ重组技术，在构建人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３４Ｘ１３）表达质粒，取得高效表达的基础上，再将人β肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦβ１４３，Ｎ端缺失２３ａａ）的ＤＮＡ片段亚克隆到该质粒外源编码序列的３′端，构建成人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈγＴＮＦβ）的重组基因表达质粒，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。含有ｈγＴＮＦβ重组基因的阳性菌经温度（４２℃）诱导，在λＰＲＰＬ启动子的控制下，高效表达了ｈγＴＮＦβ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果显示，在理论分子量３０ｋＤ处出现特异的目的蛋白表达带，表达量约占全菌蛋白的１８％。表达产物主要以不溶性的包涵体（ＩＢｓ）形式存在，通过分离纯化ＩＢｓ产物及复性处理，表达产物的抗病毒比活性与细胞毒比活性分别达到５０～５８×１０７ｕ／ｍｇｐ和４２～４９×１０７ｕ／ｍｇｐ。

关 键 词：融合蛋白 高效表达  TNF 干扰素 原核细胞

分 类 号：Q78]