文献类型：期刊文章

作　　者：陈莉[1] 王建力[2] 李惠[1] 秦婧[1] 吴园园[1]

机构地区：[1]南通大学附属肿瘤医院病理科南通大学医学院病理学教研室,226001 [2]南通大学附属医院皮肤性病科

出　　处：《中华病理学杂志》

年　　份：2009

卷　　号：38

期　　号：10

起止页码：691-696

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的探讨小分子干扰核酸（siRNA）对皮肤鳞状细胞癌（简称皮肤鳞癌）细胞株（A431）中NET-1基因的抑制作用，及其基因对癌细胞增殖、浸润的影响。方法构建针对人NET-1基因的siRNA NET-1真核表达载体（pU6H1-GFP—siRNANET-1），转染A431细胞后通过半定量RT—PCR检测细胞中NET-1 mRNA水平以筛选较有效的siRNA NET-1。同时设置针对NET-1的正、反义真核表达载体和随机序列对照组siRNA表达载体，体外瞬时转染A431细胞，RT—PCR、Western blot分别检测癌细胞内NET-1mRNA和蛋白的表达，经免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察NET-1蛋白在细胞内的表达；四甲基偶氮唑盐（MTT）法和流式细胞仪分别检测A431细胞增殖与占不同细胞周期中细胞增殖指数（PI）；划痕试验和Transwell迁移试验分别检测A431细胞的迁移和侵袭能力。结果测序证实编码NET-1序列的siRNA已经插入载体pU6H1-GFP中u6和H1两个启动子之间，其他载体测序结果符合设计要求。pU6H1-GFP载体转染A431细胞后其转染率达到80％。转染siRNA NET-1和反义NET．1后分别与未转染组比较，A431细胞中NET-1mRNA分别减少72％和62％（t值分别为-36．01，-17．65；均P〈0．05）和蛋白表达水平分别减少61％和69％（t值分别为-21．13，-33．14；均P〈0．05）；在转染48h后能显著抑制A431细胞的增殖、迁移和浸润（均P〈0．05）。在转染对照组siRNA后并未见到明显的抑制效果。转染正义NET-1后，能分别增加细胞内52％NET-1mRNA和49％蛋白表达水平（t值分别为12．49，13．98，均P〈0．01）。结论靶向NET-1的siRNA真核表达载体能特异、有效的下调NET-1基因蛋白的表达，并抑制A431细胞增殖、迁移和浸润。进而证明内源性NET-1基因的功能与A431细胞增殖、迁移、浸润有关。靶向NET-1的siRNA显示基因抑制效率比反义核酸技术更好。

关 键 词：RNA  小分子干扰 寡核糖核苷酸类  反义  细胞系  皮肤肿瘤  癌  鳞状细胞

分 类 号：R686]