文献类型：期刊文章

作　　者：江冠民[1] 刘鹏[1] 李小青[1] 王震[1] 衣艳梅[1] 杜军[1]

机构地区：[1]中山大学药学院微生物与生化制药实验室,广东广州510006

出　　处：《中华肿瘤防治杂志》

基　　金：国家自然科学基金(30873032);国家自然科学基金(30672510);广东省科技计划项目(2007B030704007)

年　　份：2009

卷　　号：16

期　　号：16

起止页码：1206-1209

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、EMBASE、IC、RCCSE、SCOPUS、UPD、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:构建小鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)二肽基肽酶催化核心序列(FAPαc)的高效原核表达载体,进行该序列的原核表达、纯化和复性,为下一步高效抗体制作和以FAPα为靶标的抗肿瘤疫苗研发提供实验基础。方法:用PCR技术,从质粒pSecTag2/Hy-groB-FAPα中扩增出编码FAPα二肽基肽酶催化核心区域的基因片段,与原核表达载体pET28α(+)连接,在BL21(DE3)工程菌中实现重组蛋白His6-FAPαc的表达,并进行纯化和复性。结果:成功构建了小鼠来源的FAPα二肽基肽酶催化核心区域的原核表达质粒,通过对转化该质粒后的感受态细菌进行菌液PCR鉴定以及对该质粒进行BamHI和XhoI双酶切鉴定,鉴定结果与预期结果完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAPαc的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,表达产量占菌体总蛋白>70%;纯化了该融合蛋白,纯化后的蛋白纯度通过灰度分析>99%;对该融合蛋白进行了复性,复性后该融合蛋白由不溶的包涵体状态变为可溶的水溶状态。结论:成功表达、纯化和复性了FAPα二肽酶催化核心区域FAPαc,为深入开展FAPα的研究奠定基础。

关 键 词：成纤维细胞激活蛋白α  原核表达  纯化  复性

分 类 号：R73-36]