文献类型：期刊文章

作　　者：王卓[1] 赵娜[2] 沈钧[3] 王影[4] 汤乃军[5] 吴蕴棠[2] 张万起[2] 宓怀风[4]

机构地区：[1]天津市疾病预防控制中心非传染病预防控制所,300011 [2]天津医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室 [3]天津医科大学公共卫生学院卫生化学教研室 [4]南开大学化学院高分子研究所 [5]天津医科大学公共卫生学院劳动卫生教研室

出　　处：《中华预防医学杂志》

基　　金：国家自然科学基金（30471440）;天津市教委资助项目（2002113） 志谢 感谢中国疾病预防控制中心营养与食品安全所吴永宁教授的指导

年　　份：2009

卷　　号：43

期　　号：8

起止页码：705-709

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的研究人工克隆表达的芳香烃受体核转位蛋白（ARNT）与天然芳香烃受体（AhR）特异性结合及其对制备的多克隆抗体识别的情况，通过两者结合与二噁[口英]（TCDD）的剂量反应关系，探索TCDD生物检测方法。方法（1）以小鼠肝组织总RNA为模板，通过RT—PCR扩增目的基因AhR—PAS[periodicity （Per）／Aryl hydrocarbon nuclear translocator（ARNT）／single—minded（Sim）]端、AhR羧基末端（AhR—C端）、ARNT—PAS端，构建含有目的基因的pGEX-5XI重组表达质粒，并采用大肠杆菌原核系统进行克隆表达。（2）用上述克隆表达的AhR片段蛋白（AhR—PAS、AhR—C）作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体。（3）从C57BL／6J纯系小鼠肝组织中提取具有结合活性的天然AhR复合物，将天然AhR复合物与结合在谷胱甘肽硫转移酶（GST）上面的融合蛋白GST—ARNT—PAS，分别在0．25、0．50、1．00、2．00pmol TCDD存在的条件下进行结合，通过亲和吸附和免疫印迹观察所形成的蛋白复合物的量。结果（1）成功构建含有目的基因AhR—PAS、AhR—C和ARNT—PAS的重组质粒，并通过大肠杆菌原核系统表达出具有结合活性的目的蛋白；（2）免疫家兔制得的多克隆抗体AhR—PAS、AhR-C的检测下限分别为5、1ng；（3）测得该法制备的小鼠肝脏匀浆中总蛋白质的浓度为60．5mg／ml；在TCDD存在的条件下，克隆得到的融合蛋白GST—ARNT—PAS能够与天然AhR复合物特异性地结合，并测得检测下限为0．25pmol，约80pg TCDD。结论成功地建立了基于克隆表达的芳香烃受体系统的TCDD生物检测方法，且检测下限达到pg级别。

关 键 词：受体 芳香烃 芳香烃受体核转位子  克隆  分子  抗体  四氯二苯并二噁[口英]  

分 类 号：R115[公共卫生与预防医学类]