文献类型：期刊文章

作　　者：贾亮[1] 施志仪[1] 张俊玲[1]

机构地区：[1]上海海洋大学生物技术研究中心,上海201306

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家自然科学基金(No.30271017);国家教育部博士项目基金(No.20040264001);上海市教委重点科研项目(No.052252)资助~~

年　　份：2009

卷　　号：25

期　　号：7

起止页码：999-1006

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为研究牙鲆甲状腺激素受体TRαA在牙鲆变态发育过程中的调控作用,将TRαA基因克隆插入融合表达载体pET30a,并在大肠杆菌Escherichia coli DE3(BL21)中进行诱导表达。表达菌株经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h后,重组蛋白TRαA表达并形成包涵体。SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。包涵体经变性后在His-Bind树脂进行亲和层析纯化,柱上复性法对重组蛋白复性,获得纯度较高的目的蛋白,蛋白复性的效果良好。用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。Dotblotting检测抗体效价达1:200000,检测证明抗体特异性良好。此外,通过染色质免疫沉淀技术鉴定了在活体细胞中多克隆抗体与TRαA的特异性结合,表明了甲状腺激素通过其受体在体内参与碱性磷酸酶(ALP)基因的转录调控。

关 键 词：牙鲆 甲状腺激素受体TRαA  原核表达 抗体制备 染色质免疫沉淀

分 类 号：S917.4[水产类]