文献类型：期刊文章

作　　者：李宏伟[1] 李慎[1] 梁平[1] 赵锦荣[1] 黄启超[1] 郭晏海[1] 雷小英[1] 刘永兰[1] 隋文君[1] 张菊[1] 颜真[1]

机构地区：[1]第四军医大学药学系药物基因组学教研室全军基因芯片重点实验室,陕西西安710033

出　　处：《第四军医大学学报》

基　　金：陕西省科技攻关课题基金(2008K09-09)

年　　份：2009

卷　　号：30

期　　号：14

起止页码：1285-1288

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、IC、ZR、核心刊

摘　　要：目的:建立基因启动子甲基化的焦磷酸测序检测方法,为基因启动子甲基化标志物的检测奠定基础.方法:从正常人全血中提取基因组DNA.采用复合巢式PCR的方法扩增目的基因,克隆构建对照标准品质粒.使用甲基化特异性焦磷酸测序检测RARβ2基因启动子CpG岛的5个甲基化位点,双脱氧测序验证.将阳性和阴性对照标准品质粒PCR扩增产物按不同比例混合后进行焦磷酸测序,检测每个点的甲基化程度,制作校正曲线.结果:构建了甲基化特异性焦磷酸测序阴性对照和阳性对照标准品.经焦磷酸测序检测后,阴性对照标准品甲基化程度为0%,阳性对照标准品甲基化程度为100%,与双脱氧测序结果一致.经对混合样品检测,甲基化频率符合线性关系,线性相关性大于0.99,斜率约为1,并且所有位点的标准偏差约为1%.结论:成功构建了甲基化特异性焦磷酸测序检测RARβ2启动子区域甲基化阳性对照和阴性对照标准品质粒.建立了甲基化特异性焦磷酸测序检测基因启动子甲基化的方法.

关 键 词：RARβ2  启动区(遗传学)  甲基化 焦磷酸测序

分 类 号：R394.3]