文献类型：期刊文章

作　　者：赵健[1] 肖伟[1] 范立强[1] 王富军[2] 吕稼锋[2] 袁勤生[1] 刘建文[1]

机构地区：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237 [2]浙江日升昌药业有限公司,浙江东阳322100

出　　处：《食品与药品》

年　　份：2009

卷　　号：11

期　　号：4

起止页码：7-11

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA-PROQEUST、IC、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的克隆表达EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,并检测其生物活性。方法PCR扩增出apoptin序列,与表达载体EC-SOD3-pET-28a连接后在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,表达产物进行Ni2+-NTA纯化和MTT活性检测。结果表达载体pET-28a-EC-SOD3-apoptin经酶切鉴定和序列分析,证明质粒构建正确,转化E.coliBL21(DE3)后,重组蛋白获得表达,Ni2+-NTA纯化后的凋亡素融合蛋白纯度达到85%以上,经噻唑蓝(MTT)法测定具有活性。结论成功构建了表达载体pET-28a-EC-SOD3-apoptin,并在大肠杆菌中表达了EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,纯化的蛋白质具有诱导HeLa细胞凋亡的能力。

关 键 词：EC—SOD3-凋亡蛋白  克隆表达 纯化 噻唑蓝法

分 类 号：Q591.2]