文献类型：期刊文章

作　　者：邓永康[1] 吴民泸[2] 刘盛邦[1] 杜林方[1] 伍黎黎[1] 李曼[1] 孟延发[1]

机构地区：[1]四川大学生命科学学院,成都610064 [2]成都医学院医学检验系,成都610083

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家科技支撑计划资助项目(2006BAF07B01)

年　　份：2009

卷　　号：29

期　　号：7

起止页码：74-79

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：对用乳糖替代异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组产朊假丝酵母尿酸酶基因在E.coliJM109(DE3)中表达进行了研究,拟建立一种高效低成本的生产重组尿酸酶的工艺路线。通过摇瓶试验对诱导所采用的乳糖浓度,诱导时机和诱导持续时间进行了优化,并考察在乳糖诱导下的目的产物表达动力学,随后在5L发酵罐上进行扩大化培养以验证摇瓶优化的结果,进一步将乳糖作为诱导剂应用于高密度发酵过程。实验结果表明乳糖诱导的最佳浓度为5g/L,最佳诱导时机是对数生长期中后期,诱导持续时间为9～10h;按照优化的条件在摇瓶和5L发酵罐上进行分批培养,重组尿酸酶最大表达量可达菌体总蛋白的26%左右,可溶性蛋白的36%左右,略高于IPTG的诱导效果;高密度发酵过程菌体终密度达到OD600值40以上,尿酸酶表达量占菌体总蛋白25%左右。

关 键 词：尿酸酶 乳糖 诱导表达  优化  高密度发酵

分 类 号：Q78]