文献类型：期刊文章

作　　者：符勇耀[1] 李正国[1] 李泮志[1] 邓伟[1] 杨迎伍[1] 王中康[1]

机构地区：[1]重庆大学生物工程学院基因工程研究中心重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心,重庆400030

出　　处：《生物技术通报》

基　　金：重庆市科委自然基金重点项目(2007BA1005)

年　　份：2009

卷　　号：25

期　　号：7

起止页码：150-155

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：利用重叠PCR技术扩增单链抗体基因或位点突变是抗体文库构建或稳定表达的关键和难点，国内外文献未见其方法学的系统报道。以不同VH、VL和Linker基因为拼接模板进行重叠PCR，针对影响重叠PCR扩增的拼接类型，引物设计，反应条件等进行优化。结果表明两段重叠连接比三段更容易实现，且扩增效果好；引物的互补序列长度一般应大于15bp，且在18—24bp时扩增效果最好；退火温度在52—600C，Mg^2＋浓度在1．5—2．5mM时对拼接的效果影响较小；直接或间接使用拼接模板均可以实现重叠PCR的扩增。利用优化策略，首次构建了抗除虫菊酯的scFv基因文库并引入抗XAC糖蛋白scFv基因的点突变，为除虫菊酯抗体文库构建和抗XAC重组抗体的稳定表达奠定了基础。

关 键 词：重叠PCR 优化  单链抗体基因 点突变

分 类 号：Q789]