文献类型：期刊文章

作　　者：刘玲玲[1] 韩跃武[1] 祝凯华[2] 李真真[1] 韩亚萍[1] 路艳[1] 王春霞[1]

机构地区：[1]兰州大学基础医学院生物化学与分子生物学研究所,甘肃兰州730000 [2]兰州大学第一医院普外二科,甘肃兰州730000

出　　处：《第四军医大学学报》

基　　金：国家"863"计划重大课题项目(2006AA10A208);甘肃省科技攻关项目(2GS064-A43-020-21)

年　　份：2009

卷　　号：30

期　　号：13

起止页码：1157-1160

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、IC、ZR、核心刊

摘　　要：目的:筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞的寡核苷酸适体.方法:体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果:经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论:利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.

关 键 词：白血病 髓样 慢性  K562细胞 SELEX 适体

分 类 号：R733.72] R733.7[临床医学类]