文献类型：期刊文章

作　　者：骆超[1] 倪吴花[2] 胡永仙[1] 谭映霞[2] 沈志坚[1] 江松福[1] 俞康[1,2]

机构地区：[1]温州医学院附属第一医院血液科,浙江温州325000 [2]温州医学院肿瘤与移植免疫研究所,浙江温州325000

出　　处：《温州医学院学报》

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目(Y206383)

年　　份：2009

卷　　号：39

期　　号：3

起止页码：213-216

语　　种：中文

收录情况：CAS、IC、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:构建pRSETA/AGAP/CD13scFv重组表达质粒,为重组CD13单链抗体/蝎毒素AGAP融合蛋白的表达奠定实验基础。方法:利用RT-PCR法从东亚钳蝎尾腺中获得AGAP目的基因,并与克隆质粒TOPO载体连接转入DH5α菌,用EcoR I和Hind III将目的基因从克隆质粒上切下并与同样双酶切后的表达质粒pRSETA连接;在含CD13单链抗体(CD13scFv)的pSecTag2HygroC/CD13-1/RFP质粒中获得CD13scFv目的基因,用EcoR I、Xho I双酶切并与同样双酶切后的pRSETA/AGAP连接转入DH5α菌,提取重组质粒进行酶切及测序鉴定。结果:目的基因AGAP与表达质粒pRSETA连接,成功构建了pRSETA/AGAP重组质粒;目的基因CD13scFv再与该重组质粒连接,成功构建了pRSETA/AGAP/CD13scFv。结论:AGAP目的基因能经RT-PCR法获得,并能成功与表达质粒连接,构建pRSETA/AGAP;目的基因CD13scFv能由pSecTag2HygroC质粒中获得,并成功与pRSETA/AGAP连接,得pRSETA/AGAP/CD13scFv重组质粒。为该重组质粒体外融合蛋白的表达及今后研究CD13scFv和蝎毒素AGAP协同性杀伤CD13阳性肿瘤细胞提供了良好的实验基础及理论依据。

关 键 词：CD13 单链抗体 蝎毒素 AGAP  质粒 肿瘤

分 类 号：R551.3]