文献类型：期刊文章

作　　者：申明霞[1] 刘涛[1] 杜丽[1] 王凤阳[1] 成鹰[1] 李治深[1] 满初日嘎[1] 林杰材[1] 祁超[2]

机构地区：[1]海南大学农学院,海口市动物基因工程重点实验室,海口570228 [2]华中师范大学生命科学学院,武汉430079

出　　处：《中国实验动物学报》

基　　金：国家自然科学基金项目(编号:30560021);海南省教育厅高校科研项目(Hj200804)资助

年　　份：2009

卷　　号：17

期　　号：3

起止页码：222-226

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的运用SMART技术,构建了五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库。方法用RNAiso reagent(TaKaRa)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA。用Powerscript TM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,Sfi I酶切和CHROMASPIN-400TM柱分离后,500 bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coli.DH5α,建成原始文库。然后,扩增文库并随机挑取单菌落,PCR鉴定重组子插入片段大小。结果经鉴定,库容量达到1.5×106克隆,原始文库滴度为9.7×109cfu/mL,扩增后的文库滴度为6.4×1010cfu/mL。重组率接近100%,插入片段大小为0.5～2 kb,平均长度约为1.1 kb。结论构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库符合建库要求,可以用于全长cDNA的筛选。为五指山小型猪新基因的获得及结构和功能研究提供了可靠材料。

关 键 词：五指山小型猪 外周血白细胞 CDNA文库 构建  鉴定  

分 类 号：Q785]