文献类型：期刊文章

作　　者：姚斌[1,2] 张春义[3] 王建华[1] 范云六[3]

机构地区：[1]中国农业科学院饲料研究所 [2]中国农业科学院生物技术中心,北京100081 [3]中国农业科学院生物技术中心

出　　处：《中国科学（C辑）》

基　　金：国家"八六三"高技术计划资助项目

年　　份：1998

卷　　号：28

期　　号：3

起止页码：237-243

语　　种：中文

收录情况：CSCD、CSCD2011_2012、普通刊

摘　　要：对来源于Aspergillusniger 96 3的植酸酶基因 phyA2进行了改造 ,包括去掉基因中的内含子和信号肽编码序列 ,在不改变所编码氨基酸的情况下 ,定点突变优化了对此基因在酵母中高效表达起关键作用的Arg密码子 .经改造的植酸酶基因按正确的阅读框架融合到毕赤酵母 (Pichiapastoris)高效表达载体 pPIC9上的α 因子信号肽编码序列 3′端 ,重组表达载体电击转化毕赤酵母得到重组转化子 ,经Southernblotting分析证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中 ,并确定了基因整合的拷贝数 .Northernblotting分析证明植酸酶基因能进行正常的转录 .SDS PAGE分析和表达产物的酶活性研究证明 ,植酸酶能有效分泌和高效表达 (Arg密码子优化后其表达量可达每毫升培养液 1 5 0 0 0U ,比Arg密码子没有优化的表达量高约 37倍 ,比原菌株A .niger 96 3的表达量高约 30 0 0倍 ) ,表达产物具有正常的生物学活性 .这是迄今为止我国饲料工业中 ,构建的第

关 键 词：植酸酶基因 毕赤酵母 高效表达  饲料 生物学活性

分 类 号：Q949.326.1[植物生产类] S816.71]