文献类型：期刊文章

作　　者：马平平[1] 王会娟[1] 朱娟莉[2] 陈超[1]

机构地区：[1]西北大学国家微检测系统工程技术研究中心,西安710069 [2]陕西北美基因股份有限公司,西安710069

出　　处：《中国医药生物技术》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(2006AA020705);陕西省"13115"科技创新工程重大科技专项项目(2007ZDKG-76)

年　　份：2009

卷　　号：4

期　　号：3

起止页码：194-199

语　　种：中文

收录情况：CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的体外构建重组人细胞色素P450 2C9(CYP2C9)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达体系,且利用该体系研究药物对CYP2C9基因多态性酶抑制程度的差异性。方法将CYP2C9*1(野生型)和通过定点突变PCR法获得的等位基因突变克隆CYP2C9*2(R144C突变体)和CYP2C9*3(I359L突变体)电穿孔转化酿酒酵母后,差速离心法制备酿酒酵母微粒体,蛋白免疫印迹法检测3种CYP2C9微粒体蛋白的表达;HPLC法检测CYP2C9*1与特异性底物双氯芬酸的反应,记录产物峰面积值,利用Prism Demo软件计算米氏常数(Km)值;利用荧光底物BOMCC对3个等位基因进行酶活性分析,分别计算Km、最大酶促反应速度(Vmax)和内在清除率。采用荧光高通量方法测定5种药物(甲苯磺丁脲、磺胺苯比唑、酮康唑、氟西汀和泰洛平)对酶的抑制程度。结果蛋白免疫印迹结果表明,3个等位基因均表达目的蛋白。CYP2C9*1代谢双氯芬酸的Km值为5.34±0.96μmol/L;以BOMCC为底物时,CYP2C9*1和CYP2C9*2的Km值分别为16.94±4.78、34.73±5.51μmol/L,Vmax分别为0.21±0.10、0.12±0.01pmol/(min·pmolP450),内在清除率分别为0.012±0.003、0.003±0.0001μl/(min·pmolP450);CYP2C9*3无催化活性。5种药物对CYP2C9*1的抑制程度:磺胺苯比唑>酮康唑>氟西汀>甲苯磺丁脲>泰洛平;对CYP2C9*2的抑制程度:磺胺苯比唑>甲苯磺丁脲>酮康唑>氟西汀>泰洛平。结论成功构建了重组人细胞色素CYP2C9及其多态性等位基因(CYP2C9*2、CYP2C9*3)酿酒酵母表达系统;初步建立了药物对CYP2C9基因多态性酶的抑制作用体外检测体系,为指导临床联合用药奠定了基础。

关 键 词：细胞色素P450酶系统 多态性,单核苷酸  半数抑制浓度 药物相互作用

分 类 号：R96]