文献类型：期刊文章

作　　者：黄湘[1] 谭家余[1] 邱玉林[1] 梁文军[1] 李晓栋[1] 肖光文[1] 李明[2]

机构地区：[1]嘉应学院医学院基础部病原教研室,梅州514031 [2]南方医科大学生物技术学院,广州510515

出　　处：《中国免疫学杂志》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA02A311)

年　　份：2009

卷　　号：25

期　　号：6

起止页码：539-543

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:制备抗人LOC51255单克隆抗体,并构建pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒,了解LOC51255在人肝癌细胞株HepG2中的亚细胞定位情况,为进一步研究其功能提供实验工具和基础。方法:以纯化的重组蛋白pET28b/LOC51255为抗原,免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备LOC51255单克隆抗体,并用间接ELISA法和Western blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定;通过构建含红色荧光蛋白(pDsRed1)的pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒,转入人肝癌细胞株HepG2表达重组蛋白,并对LOC51255进行亚细胞定位。结果:成功建立2株稳定分泌抗LOC51255单克隆抗体的杂交瘤细胞株;ELISA检测抗LOC51255单克隆抗体的腹水效价分别为1∶12 800和1∶25 600。2株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。通过Western blot实验证实,2株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性LOC51255蛋白。荧光显微镜观察发现LOC51255主要定位于HepG2细胞的细胞浆。结论:成功制备了2株效价高、特异性好的抗LOC51255单克隆抗体,制备的单克隆抗体可用于LOC51255蛋白的鉴定;亚细胞定位分析证实LOC51255主要表达于HepG2细胞的胞浆,为LOC51255的生物学功能研究奠定了基础。

关 键 词：LOC51255  杂交瘤 单克隆抗体 真核表达质粒 亚细胞定位

分 类 号：R392.12]