文献类型：期刊文章

作　　者：王微[1] 李秀锦[2] 仲飞[1] 王幸兴[1] 韩冬梅[1] 靳慧君[1] 潘素敏[1] 李巍[1]

机构地区：[1]河北农业大学动物科技学院基础兽医系,保定071001 [2]燕山大学环境与化学工程学院生物工程系,秦皇岛066004

出　　处：《微生物学报》

基　　金：国家自然科学基金(30771586);河北省自然科学基金(C2008000244);河北省人事厅留学人员科技活动择优资助项目(20080808)~~

年　　份：2009

卷　　号：49

期　　号：5

起止页码：648-652

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PROQUEST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】利用真核细胞分泌表达犬细小病毒VP2蛋白和研究其特性。【方法】为构建犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)VP2基因的真核分泌型表达载体,首先通过酶切从含有人CD5信号肽序列的质粒中将CD5信号肽基因片段切出,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1A的多克隆位点上,构建成pcDNA3.1-CD5sp质粒。然后再通过PCR方法从含有犬细小病毒VP2基因的质粒中扩增VP2基因,并将其插入到pcDNA3.1-CD5sp载体中CD5信号肽的下游,构建成VP2基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5sp-VP2。经磷酸钙介导转染293T细胞,使其在真核细胞中进行分泌表达,并通过ELISA检测表达的VP2蛋白与犬转铁蛋白受体(TfR)结合的活性。【结果】序列分析结果表明,本实验构建的犬细小病毒VP2基因真核分泌型表达载体结构正确,将该表达载体转染的293T细胞,在培养基中通过Western-blot检测到有VP2重组蛋白的存在。经ELISA检测表明表达的重组VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。【结论】利用人的CD5信号肽实现了犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达,表达的VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。

关 键 词：犬细小病毒 VP2蛋白 293T细胞 分泌性表达 TFR

分 类 号：S852.65]