文献类型：期刊文章

作　　者：丁威[1] 董海艳[2] 薛峰[2] 严杰[2] 楼永良[1]

机构地区：[1]温州医学院检验医学院微生态学研究所,325035 [2]浙江大学医学院病原生物学系

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

基　　金：传染病国家科技重大专项项目（2008ZX10404）;浙江省科技厅国际合作重点项目（2006C24003）

年　　份：2009

卷　　号：29

期　　号：4

起止页码：370-374

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的了解我国15群15株问号钩端螺旋体（简称问号钩体）参考标准株携带ompA基因情况，重组表达OmpA（rOmpA）并鉴定rOmpA的免疫原性和免疫保护性。方法采用酚．氯仿法提取问号钩体基因组DNA，PCR扩增全长ompA基因，T—A克隆后测序。构建问号钩体黄疸出血群赖型56601株ompA基因的原核表达系统，采用SDS—PAGE及Bio—Rad凝胶图像分析系统检测rOmpA表达情况及其产量。rOmpA免疫家兔以获得抗血清，采用免疫扩散试验检测抗血清效价。采用Western blot检测rOmpA与其抗血清和问号钩体56601株全菌抗血清的免疫反应性，显微镜凝集试验（MAT）检测rOmpA抗血清对15株问号钩体的交叉凝集情况。分别采用问号钩体黏附J774A．1细胞模型和豚鼠感染模型，了解rOmpA兔抗血清黏附阻断及rOmpA免疫保护作用。结果15株问号钩体均含有序列保守的ompA基因，双曲钩体Patoc Ⅰ株则否。rOmpA表达量约占细菌总蛋白的20％。rOmpA能诱导家兔产生抗体，其抗血清免疫扩散效价为1：4。兔抗血清及问号钩体56601株全菌抗血清均能与rOmpA产生阳性Western blot信号。rOmpA抗血清对15株问号钩体的MAT效价为1：20～1：320。1：10～1：160稀释的rOmpA抗血清均能阻断问号钩体黏附J774A．1细胞，100μg和200μgrOmpA对豚鼠的免疫保护率分别为50．0％和75．0％。结论ompA基因仅存在于不同血清群致病性问号钩体基因组中。rOmpA具有较好的抗原性，多种免疫学方法检测显示，有可能作为通用型问号钩体基因工程疫苗的候选抗原。

关 键 词：问号钩端螺旋体 ompA基因  重组表达  免疫原性 免疫保护性

分 类 号：R392]