文献类型：期刊文章

作　　者：曹莹[1] 王卫国[1] 李琳[2] 张慧敏[1] 王广发[1] 庞建新[1] 吴曙光[1]

机构地区：[1]南方医科大学药学院新药评价中心,广东广州510515 [2]南方医科大学药学院药理学系,广东广州510515

出　　处：《南方医科大学学报》

基　　金：国家自然科学基金(306724487)

年　　份：2009

卷　　号：29

期　　号：4

起止页码：652-655

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的对人端粒酶RNA进行多位点的突变并构建该突变体的酵母三杂交诱饵质粒,且进行毒性检测。方法根据人端粒酶RNA(hTR)序列及突变位点设计引物,运用重叠延伸PCR法对hTR基因的第41位、第80位及第102位碱基进行T→A突变,将突变后的片段克隆入PMD18T载体,经测序正确后再亚克隆到酵母三杂交诱饵质粒PRH3'中,PCR及酶切鉴定。鉴定成功的重组诱饵质粒转化到酵母细胞L40ura3/pHyblex/ZeoMS2进行毒性检测。结果经过测序验证,该基因预期位点突变成功且其他序列未发生随机突变,重组诱饵质粒构建成功,转化酵母菌之后对宿主无毒性。结论成功构建了hTR突变体的重组质粒PRH3'-hTRm,可作为酵母三杂交系统中的"诱饵"。

关 键 词：人端粒酶RNA 酵母三杂交  重叠延伸PCR 定点突变 诱饵质粒  

分 类 号：R73-3]